[許全智] 串聯懸浮捕獲法與固定金屬離子親和層析法用於深入分析植物磷酸化蛋白質體學
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串聯懸浮捕獲與固定金屬離子親和層析法實驗設計。干擾雜質例如：光合作用色素、次級代謝物在懸浮補繪微量管柱沖洗步驟被移除，蛋白質在管柱內酶解成胜肽。磷酸化胜肽利用直接裝填策略進行純化，並利用液相層析串聯式質譜儀分析。
植物磷酸化蛋白質體學提供了分析植物中磷酸化訊息傳遞的全面視角；然而，這需要一個具有高通量、高靈敏度和精確定量的方法。儘管蛋白質沉澱法在去除雜質和提高樣品蛋白質純度方面被廣泛使用，但它限制了植物磷酸化蛋白質體學分析的靈敏度和通量。蛋白質體核心實驗室開發了一個基於懸浮補獲(suspension trapping)的樣品前處理方法，此方法結合了懸浮補獲微量管柱與鐵離子固定金屬離子親和層析法微量滴管，稱為串聯懸浮捕獲與固定金屬離子親和層析法(tandem S-Trap-IMAC)。與傳統蛋白質沉澱法相比，此方法能降底蛋白質在樣品製備過程中的損失，因此能將阿拉伯芥磷酸化蛋白質體的鑑定覆蓋率提高了30%以上，並提高了多重磷酸化胜肽的鑑定數目、定量精準度和縮短樣品製備所需的時間。此方法被用於分析阿拉伯芥幼苗離層素(Abscisic acid) 誘導磷酸化訊息傳遞，並對於四個時間點上的核心離層素訊息傳遞酵素上的磷酸化位點進行了定量分析。結果顯示了60%早期離層素誘導的磷酸化胜肽是含有多重磷酸根，這表明它們在早期離層素訊息傳遞的重要性。
本文第一作者陳瑾玟為蛋白質體核心實驗室研究助理，論文已刊載於美國化學學會期刊《分析化學》(Analytical Chemistry)。