[麥東倈/麥卓琍] 藉由遺傳掃描指出CWC16/Yju2/CCDC130與SMU1在阿拉伯芥內核醣核酸(RNA) 變異剪裁(alternative splicing) 所扮演的角色

Figure legend: Hyper-GFP phenotype of new hgf mutants
Hyper-GFP phenotype of hgf2-1/cwc16a, hgf3-1/smu1 and hgf4-1smfa mutant seedlings as well as the wild-type T line and untransformed Col-0 growing on solid MS medium as visualized under a fluorescence stereo microscope. In the hgf mutants, GFP fluorescence is considerably increased in the seedling stem and shoot apex, which is visible between the two seedling leaves (these appear red owing to auto-fluorescence of chlorophyll at the excitation wavelength of GFP).

為了確認植物中前驅訊息核醣核酸(pre-mRNA)剪裁過程內所參與的因子,我們建構了綠螢光報導基因變異剪裁系統於阿拉伯芥內。在野生型植物內共有三種因子影響綠螢光報導基因剪裁系統,這三種因子分別是prp8、rtf2與hgf1,但是只有一種可以表達綠螢光蛋白質。相反的在阿拉伯芥種子生張系統 (seedling ),野生型內可以表現中等數量的綠螢光蛋白質而在突變型內經由歸納,可以表現弱綠色螢光(GFP-weak)與強綠螢光(Hyper-GFP)蛋白質。(此強弱之分即表現量多與少之分) 至於強與弱綠色螢光取決於之前所提及三種因子的比例而定。在弱綠螢光的系統中在我們之前的分析確認prp8與rtf2突變株具有高比例的非剪裁綠螢光基因。相反的在coilin 突變株(coiling-deficient hyper-gfp1(hgf1)mutant)具有高比例減裁完成的綠螢光基因。最後導致螢光強度增強。除了分析coilin突變株之外我們另外分析與coilin功能類似的蛋白質SMU1、SmF與CWC16(Yju2/CCDC130)。其中發現smu1與cwc16突變株具有高比例減裁完成的綠螢光基因。最後導致螢光強度增強。另外分析smu1 和cwc16基因序列其中非轉錄序列(intron)具有突變進一步影響轉錄核醣核酸的剪裁(mRNA splicing),由結果可知SMU1與CWC16可能直接影響核醣核酸剪裁導致影響基因的表現。(Kanno et al., 2017, RNA)